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万能”的PCR实验室可开展哪些检验项目

2022年11月23日 10:45:05
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PCR实验室又叫基因扩增实验室,实时荧光定量PCR技术是DNA定量技术的一次飞跃,是用于放大特定的DNA片段,可看作生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统,能迅速掌握患者体内的病毒含量,其精确度高达纳米级别。而实时荧光定量PCR则是实现该项技术的载体。PCR实验常用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病,通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法,测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。PCR检测方法具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点,因此被临床医生广为认可,已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的禽疫病诊断。

(一)病原体测定

示例:新型冠状病毒核酸检测。方法学:荧光PCR法。用途:用于体外定性检测新型冠状病毒感染的肺炎疑似病例、疑似聚集性病例患者、其他需要进行新型冠状病毒感染诊断或鉴别。检测基因:新型冠状病毒(2019-nCoV)ORFlab和N基因、E基因。标本类型:上呼吸道标本:咽拭子、鼻拭子;下呼吸道标本:呼吸道抽取物、肺泡灌洗液样本、肺组织活检标本。检测流程:(1)核酸检测前的生物安全防护(工作人员个人三级防护的穿戴)→(2)样本的灭活(56℃灭活30分钟)→(3)样本的核酸提取(手工、核酸提取仪)→(4)PCR体系的配制和模板加样→(5)上机检测及结果分析→(6)检测后的消毒。其他病原体检测:HIV、甲乙丙肝、HPV、肺支、肺衣、EB病毒、腺病毒、胞病毒、甲乙流、埃博拉病毒、B族链球菌。适合开展的医院和科室:儿童医院、妇幼、儿检所、第三方、各种级别的有需求的医院。(二)遗传病检测

示例:人Y染色体AZF区微缺失检测。方法学:荧光PCR法。用途:本产品用于定性检测男性全血样本中 Y 染色体无精子症因子。(azoospermia factor,AZF)区域是否存在缺失,具体检测缺失位点为:AZFa:sY84、sY86;AZFb:sY127、sY134;AZFc:sY254、sY255;AZFd:sY145、sY152。临床研究表明,Y 染色体 AZF 区(AZFa, AZFb, AZFc, AZFd)不同程度的缺失可导致男性的少精症、无精症或精子畸形等症状,从而导致男性不育。本试剂盒可辅助诊断确诊不孕不育患者的病因分析,检测结果仅供临床参考,不能单独用做确诊或排除病例等临床诊断的依据。标本类型:全血。

检测流程:(1)样本处理及 DNA 提取(在标本制备区完成)→(2)样本处理及 DNA 提取(在标本制备区完成)→(3)加样(在标本制备区完成)→(4)PCR 扩增(在扩增区完成)→(5)结果分析与判定。其他同类项目:地贫、耳聋、苯丙酮尿症(PKU)、蚕豆病(G6PD)、脊髓型肌萎缩(SMA)、进行性肌营养不良(DMD)、强直性脊柱炎(HLA)、血友病。适合开展的医院和科室:妇幼、第三方、各种级别的有需求的医院

。(三)个性化用药

示例:心血管个体化用药指导检测:CYP2C19基因突变检测试剂盒、CYP2C9基因突变检测试剂盒、ALDH2基因突变检测试剂盒、MTHFR基因突变检测试剂盒。方法学:荧光PCR法。用途:氯吡格雷、华法林、硝酸甘油及叶酸均为心血管临床上常见的药物,心血管用药指导分子生物学检测,明确基因分型,药学部临床药师根据检测结果,并综合考虑患者自身因素、临床诊断以及联合用药等相关信息,为临床出具个体化用药建议。标本类型:全血(本试剂盒无需提取DNA,加样直接PCR)。

检测流程:(1)配制反应体系(在样本准备区完成)→(2)直接加入全血(在标本制备区完成)→(3)PCR 扩增(在扩增区完成)→(4)结果分析与判定。其他同类项目:他汀类用药(ApoE)、β受体阻滞剂(ADRB1)、儿童安全用药、肿瘤靶向化疗个性化用药(EGFR、kRAS)类。

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